蛋白中的色氨酸和酪氨酸可以被280nm的紫外光激發(fā)并釋放出熒光,其熒光性質(zhì)與所處的微環(huán)境密切相關(guān)。蛋白變性過程中,色氨酸從疏水的蛋白內(nèi)部逐漸暴露到溶劑中,熒光釋放的峰值也從330nm逐漸轉(zhuǎn)移到350nm。
內(nèi)源差示掃描熒光技術(shù)(intrinsic fluorescence DSF),通過檢測溫度變化/變性劑濃度變化過程中蛋白內(nèi)源紫外熒光(350nm/330 nm比值)的改變,獲得蛋白的熱穩(wěn)定性(Tm值)、化學(xué)穩(wěn)定性(Cm值)等參數(shù)。相比傳統(tǒng)的方法,無需添加染料,通量高,樣品用量少,數(shù)據(jù)精度高。
緩沖液/制劑優(yōu)化 Thermal Shift Assay 等溫穩(wěn)定性 蛋白變復(fù)性 |
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